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常見的peptide tag有FLAG/HA/His/MYC tag這幾種 我google了一下 鮮少有人做出這四種的比較圖.... 之前上課有聽老師說His tag純化或是Western會比較髒 FLAG效果比較好 但學姐卻說FLAG很髒 His tag比較好 請問有人對這幾種tag有比較明確的了解嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.129.77.13
turtle24:抗體的品質比較重要 03/31 17:49
tsubasawolfy:有些東西是怎麼洗也會殘留的...萬惡的HSP跟Actin.. 03/31 18:12
bluecsky:做出來髒不髒跟你抗體品質還有你洗的操作這些比較有關 03/31 22:35
leoblack:flag很髒?!flag抗體好到1:50K都還染得出來~效果超好~ 04/01 18:40
leoblack:不過his到目前為止還沒用過乾淨的就是了~^^" 04/01 18:41
leondemon:我說的髒是背景很髒~ 04/01 21:39
blence:這裡面都要用抗體辨識tag做純化,除了His,它通常用Ni-NTA等 04/01 22:00
blence:離子抓polyHis,而很少用抗體做,因此His特異性不夠高容易髒 04/01 22:02
leoblack:我的意思就是指,說flag會髒~是不是抗體濃度太高了?! 04/02 00:35
tsubasawolfy:不懂背景很髒是啥意思..IP的髒是指non-specific吧? 04/02 08:14
tsubasawolfy:western做出背景黑黑的那是western技術問題 04/02 08:16
leoblack:樓上~有些抗體的specificity真的比較差,所以背景會髒~ 04/02 11:05
leoblack:同張membrane不同抗體hytbrid,背景值就會不同~ 04/02 11:06
tsubasawolfy:現在的Flag不是都指定sigma M2嘛- -a 04/02 11:36
leoblack:推樓上~sigmaM2好用又乾淨~會髒就是WB作太差或Ab濃度太高 04/02 11:48
snowypuppy:我們家試過FLAG/HA/Myc..結果發現跟接的construct有關 04/07 01:11
snowypuppy:並沒有一定的定論...要測試!!有的接Flag好 有的接myc好 04/07 01:12
bigcat24:若同是pcDNA3接myc-His or V5-His V5認的比較好 04/07 10:40