推 tchan:推！清楚明瞭的實驗設計邏輯，看似簡單卻很多人會忽略... 07/11 15:04
推 higamanami:"目標miRNA序列拿去合成primer" 這句是.... 07/11 16:09
→ soom:那是不建議使用的偷吃步.. 07/11 22:35
※ 引述《xxman5359 (ALAN)》之銘言：
: 想請問大家利用real-time PCR偵測miRNA的表現量時所使用的control是哪一種?
還是希望這位板友參考發文規範多打一點字，畢竟一行文很難清楚的問一個問題
這個問題其實應該要問的更仔細一點並且請把你所遇到的難題試著描述出來
比如你今天是要做哪種樣本? 已經做了什麼實驗得到什麼結果? 所以發現有什麼問題?
另外你所說的control是指什麼？一個實驗最重要也至少應該要有的三種control
包含了positive, negative, internal
negative control就是一定要做不出來的control
可以是把template拿來用滅菌水替代，用在確定PCR反應本身有沒有污染
可以是在轉cDNA時不加反轉錄脢的RNA control，用在確定RT反應有沒有污染
positive control則是一定要做出來的control，用在確定RT或PCR過程有沒有出錯
可以是確定有表現目標miRNA的樣本，可以是你的樣本裡面一定會表現的基因
甚至狠一點直接把你目標miRNA序列拿去合成primer都可以當做positive control
internal control則是在你的每個樣本裡面表現量應該要一致的control，可以用在
半定量實驗結果或甚至是RT或PCR反應的確效
internal control則多半是看你的樣本決定，在miRNA的實驗裡面常用到的是rRNA
像是U6, 18s 這些都常常看到，primer序列也可以在網路上找到
需要注意的是這些control彼此是獨立的，而且一個實驗的流程通常必須要有多組的
positive及negative control。上面列出來的control是我會在某一組實驗裡面全部
都做的，所以常常會發現我只想要比較兩個sample中某個miRNA的表現量，但所需要
的control組都比實驗組多的多，還每個都要三重複
希望以上的嘮叨對你有幫助，也還希望你做出什麼結果有什麼心得都要上來分享一下
那怕是幾行字，因為也許我們都可以從中學到些什麼。但若是你最後選擇沉默，那也就
失去了在討論版上發問的意義了
祝 實驗順利
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.44.14.80