※ 引述《tunafung (無)》之銘言:
: 我知道Cre-loxP的系統是怎麼作用
: 我想請問的是一般用這個系統的時候
: 是用什麼策略來交配小鼠
: 比如說我現在有個 vil-Cre/+ 的老鼠
: 跟ALDH2 Lp/Lp的老鼠配種後 接下來是要跟哪種基因型的小鼠在配
: 然後繁殖 感謝各位大大
通常我在看這個系統的時候 會注意的是
1.Cre是在什麼條件下會被表現?
2.loxP 包住的是什麼區域?
像你提到的vil-Cre似乎是會在大小腸、腎臟還有proxima tubule這些地方表現cre
於是在發育的過程中,只要有表現過villin的細胞,它的ALDH2都不會表現
所以會造成這隻老鼠的大小腸、腎臟還有proxima tubule等部分都不會有ALDH2
接下來就是要看你怎麼設計了,比如說你想要把所有Cre作用過的細胞都做標記,
那你可以把帶loxP-stop codon-loxP-eGFP 這樣repoter的老鼠在配依次
你就可以拿到cre作用後會有GFP信號的老鼠,可以很簡單的透過flow去分析/分離
(當然上面只是我在嘴砲,實際上還是要看看你的實驗需要)
而對於Cre的操縱也還有很多種更細微的調控法,
比如常常看到Cre-ER這種在Cre上面接了estrogen receptor的fusion protein,
於是就會造成需要給老鼠estrogen的時候才會開始有Cre的表現與作用
還有loxP包起來的區域也會有不同的效果,比如包了某個基因的exon,那這個基因
可能就會被KO。又或者如果是包了某個CDS前方的stop codon,那這樣子Cre作用後
反而會打開這個CDS的表現。
所以在看這個系統的時候真的是處處玄機有夠刺激啊..
這只是我個人的觀點啦,有錯還請版上各位指正..
(尤其是柏油大神,他們家可是這方面的專家)
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