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各位前輩先進大家好 我跑完Western後用ponceau S染色後發現蛋白無法順利的轉印到PVDF上 像是卡了很多小氣泡的感覺 如下圖 https://i.imgur.com/TOfchPe.jpg
最後呈色時那些轉印不完全的區域訊號就會變得破碎 希望有前輩能幫我解決這個問題 謝謝!! SDS-PAEG電泳條件:70v, 2 hr 20 min 轉漬條件:100v, 1.5 hr, 電流0.2A~0.3A protein 10 ug -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 101.10.5.84 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1682649706.A.889.html
TrueTomny: 就….泡泡啊,filter paper、PVDF和gel這三者之間有氣 04/28 11:27
TrueTomny: 泡,有些很小的氣泡在組裝的時候可能看不到,但是一通 04/28 11:27
TrueTomny: 電,溫度升高氣體溶解度降低加上體積膨脹就出現了,有 04/28 11:27
TrueTomny: 加SDS會更嚴重,尤其你用100 V,轉完應該很熱吧? 04/28 11:27
Bows: 同意樓上,這就是你疊三明治時的氣泡沒趕掉,這圖應該是是g 04/28 12:45
Bows: el跟PVDF之間的氣泡的影響,請在疊三明治時多看幾眼,或請 04/28 12:45
Bows: 學長姐幫忙檢查 04/28 12:45
leptoneta: 中間氣泡沒弄掉啊 04/28 13:40
jabari: 先去練桿蔥油餅 04/28 13:44
joy2139: 有泡泡啦 滾輪多滾幾次 同一方向滾 04/29 23:53
Ianthegood: 以上 還有疊起來進tank灌buffer後整個tank往桌上平平 04/30 16:32
Ianthegood: 拍 拍到沒有氣泡再從sandwich跑出來 04/30 16:32
xxtomnyxx: 我個人不推薦用桿的就是了,有些 gel 桿一桿會變形 05/01 01:16
maurice9325: 如果是PVDF, 甲醇活化後先用fresh trans buffer rins 05/09 17:44
maurice9325: e一下,轉個幾分鐘,可以降低小氣泡產生。 05/09 17:44
aa08175: 歐歐 08/08 10:51