[求救] 放大現有cDNA library

[jonsauwi (JBY)]

最近要做一個實驗，需要購買comercial human cDNA library進行gene放大的實驗，

因為需要放大的gene非常多（有快要200組的primer要做），

一般買來的cDNA library大多只能做20 ~ 40 reaction，還要考慮失敗的問題，

由於cDNA library真的很貴，要多買幾管的話會非常花錢，

請問是否有可能用PCR的方法先將library放大，且仍保留library的diversity呢？

雖然知道從RNA反轉成cDNA的方法，但是不知道是否可以用在放大cDNA上...

非常感謝！


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→ blence: 這library不是在vector上嗎？
→ jonsauwi: 看DATASHEET是RT轉完的產物，不是在Vector裡的樣子...y
推 Ice9: 小心實驗結果會失真。你們論文上也不能省掉這一步沒寫。
→ Ice9: 是否能考慮適量稀釋原液？
→ blence: cDNA pool如果不是接在vector就稱做library有點怪,純粹RT
→ blence: 就是cDNA,如同一般不會說拿cDNA library做qPCR看表現量
→ blence: 不知道你的目的,如果是要拿到full-length clone,稀釋跟自
→ blence: 行放大都不是好辦法
→ jonsauwi: 原來如此...我們現在可能會再去找看看是否有直接接在
→ jonsauwi: vector裡可自行放大的library...
→ jonsauwi: 我們是要從這library裡拿到full-length clone的
→ blence: 就這個狀況我會multi-plex,或真的花錢買大量的折扣
→ jonsauwi: 感謝樓上，我再研究看看並跟老闆討論是要用那種方案...
推 lemonteas: 好奇為什麼不從RNA開始？
→ xxtomnyxx: RNA樣本哪來啊XDDD  人類的耶XD
→ lemonteas: 抽血.醫院檢體？
推 Ianthegood: 如果是RT產物 5' ssDNA linker ligation -> polyT PCR
→ Ianthegood: ?
→ blence: 我猜原po的應該只是tissue-specific cDNAs,就像下面這種,
→ blence: ScienCell Research Laboratories #1104
→ blence: Human Brain Vascular Smooth Muscle Cell cDNA
→ blence: 才會覺得只有20~40 reaction可用
→ blence: library應該像Human Embryonic Stem Cell Primary cDNA
→ blence: Library, XpressBio #12260-P這種vector形式的,可用上千次