→ xxtomnyxx: 我這個plasmid應該是屬於Stable transfection對嗎？ 09/24 01:45
→ xxtomnyxx: ↑不對，這種transfection用的vector你沒有linearize， 09/24 01:46
→ xxtomnyxx: 放到細胞基本上都是transient transfection，只有極少 09/24 01:47
→ xxtomnyxx: 數會因低機率嵌入genome而變成stable，你應該先挑到 09/24 01:48
→ xxtomnyxx: stable clone 再用它打老鼠 09/24 01:48
→ xxtomnyxx: stable transfection後細胞一定會永遠表現嵌入的基因 09/24 01:52
→ xxtomnyxx: ↑不一定，還是有機會被epigenetic regulation 關掉， 09/24 01:53
→ xxtomnyxx: 看你的 Luc 用哪個 promoter 表現，pGL4.1-Luc2(Neo) 09/24 01:54
→ xxtomnyxx: 本身的 Luc 應該沒有 promoter 才對吧？你們插了什麼進 09/24 01:55
→ xxtomnyxx: 去表現它？ 09/24 01:55
→ o81628: 您好，這個plasmid是直接買現成並委託放大的，我看了一下 09/24 02:20
→ o81628: 產品說promoter有SV40,HSV-TK及CMV,不知道是否有回答您的 09/24 02:20
→ o81628: 問題 09/24 02:20
→ o81628: 「更正」 我們買的pGL4.51-luc2-Neo含有CMV promoter 09/24 02:39
→ rebirth: 看起來是stable pool不是stable clone，pool是heterogen 09/24 07:56
→ rebirth: eous population ，一群表現量有高有低甚至沒表現的混合 09/24 07:56
→ rebirth: 細胞群，或許生長時間久之後這群pool變成只剩下沒表現的 09/24 07:56
→ rebirth: 細胞，而沒有luc activity 09/24 07:56
→ rebirth: 另外你們selection的時間多久，有確認真的已經是stable 09/24 07:59
→ rebirth: cell line了嗎？ luc cassette 真的有insert into host 09/24 07:59
→ rebirth: genome了嗎？ 09/24 07:59
→ rebirth: 個人經驗是挑選stable clone而非pool，確認已經建立stab 09/24 08:03
→ rebirth: le line，然後放大成MCB凍存與使用 09/24 08:03
→ blence: 搜尋Imanis Life Sciences,如果你們對於建立stable很陌生 09/24 10:31
→ blence: 購買人家建立好Luc, GFP等reporter的細胞可能更有效率 09/24 10:31
→ blence: 另外有人也遇到腫瘤變大IVIS消失的情況,懷疑是每次照之前 09/24 10:36
→ blence: 給的substrate連續幾週下來被免疫熟悉後消滅掉了 09/24 10:39
→ o81628: 謝謝大家的指點，看起來我只有stable pool的建立導致整體 09/24 13:06
→ o81628: 細胞的冷光表現不一致。這部分在抗生素篩選後將團聚的細胞 09/24 13:06
→ o81628: 打散稀釋到多孔盤中繼續篩選，能夠長出來的就算是stable c 09/24 13:06
→ o81628: lone嗎？ 09/24 13:06
→ o81628: 之後會建議老師購買冷光細胞株QvQ 希望他聽得進去 09/24 13:22