我的推理，最有可能是：
1. 你的mini-prep裡面沒有plasmid，可能是ampicillin放太久過期，
導致菌不會做plasmid。如果是用kit，extraction失敗的機會比較小，
因為mini-prep很難失敗。總之可以跑一點mini prep確認真的有plasmid。
2. PCR of mini-prep有可能失敗了。這個理由比較多，最有可能是：
- mini-prep的template濃度太高或太低，可以做一個spectro，調到最佳的
template量。
- annealing temperature不正確，請依照primer的Tm調整。
加油 :)
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'Now I know what it's like to be God!'
- Frankenstein, 1931 (Movie).
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