※ 引述《shingo123 (shingo)》之銘言:
: ※ 引述《olin.bbs@bbs.bio.thu.edu.tw (想以玫瑰祭妳。)》之銘言:
: : 有點看不懂你表達的
: : 酒精Wash完後以TE溶掉DNA pellet,再沉澱DNA??
: : 是要re-salting out嗎?
: : 再說請楚點你的問題吧~ TE溶掉DNA後沒做特殊處理怎麼得到pellet..
: 加完TE後,還有加RNase A,然後再加1.6M NaCl放4度C讓它沉澱overnight,但隔天
: 再以top speed離心後,卻完全看不到pellet
我個人所做操作的是alkaline lysis的方法,也就是不用kit的 (因為老闆礙於經濟考量)
我是把70%的EtOH air dry之後,直接以TE bf. ( contain 20 ug/ml的 RNase A,
store in 4℃,目前以配了6個月,還是很好用!) 回溶。
我會在37℃ dry bath incubation,1~2小時,提升RNase A的作用。
看閣下的目的,應該是為了要除去DNA solution中,大部份的RNase A,但是不加醇類
(ex.EtOH or 2-propanol)的鹽析方式,會讓DNA的回收率變差,我不知道會差多少,但
應是會差很多的!
還有如果你也是用alkaline lysis的方法操作的話,你所看到的nucleic acid pellet,
會大部份都是RNA,所以如果說原來就不多,而RNase A作用完之後,沉澱完看不見Pellet
,也別太緊張,DNA還是存在的,只是相對於RNA的量來說太少,所以變成看不到;回溶完
,跑片膠,你將會看到DNA在對你說: Hello.........
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有錯,請指教!
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