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※ 引述《shingo123 (shingo)》之銘言: : ※ 引述《olin.bbs@bbs.bio.thu.edu.tw (想以玫瑰祭妳。)》之銘言: : : 有點看不懂你表達的 : : 酒精Wash完後以TE溶掉DNA pellet,再沉澱DNA?? : : 是要re-salting out嗎? : : 再說請楚點你的問題吧~ TE溶掉DNA後沒做特殊處理怎麼得到pellet.. : 加完TE後,還有加RNase A,然後再加1.6M NaCl放4度C讓它沉澱overnight,但隔天 : 再以top speed離心後,卻完全看不到pellet 我個人所做操作的是alkaline lysis的方法,也就是不用kit的 (因為老闆礙於經濟考量) 我是把70%的EtOH air dry之後,直接以TE bf. ( contain 20 ug/ml的 RNase A, store in 4℃,目前以配了6個月,還是很好用!) 回溶。 我會在37℃ dry bath incubation,1~2小時,提升RNase A的作用。 看閣下的目的,應該是為了要除去DNA solution中,大部份的RNase A,但是不加醇類 (ex.EtOH or 2-propanol)的鹽析方式,會讓DNA的回收率變差,我不知道會差多少,但 應是會差很多的! 還有如果你也是用alkaline lysis的方法操作的話,你所看到的nucleic acid pellet, 會大部份都是RNA,所以如果說原來就不多,而RNase A作用完之後,沉澱完看不見Pellet ,也別太緊張,DNA還是存在的,只是相對於RNA的量來說太少,所以變成看不到;回溶完 ,跑片膠,你將會看到DNA在對你說: Hello......... -- 有錯,請指教! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.139.132