Re: [問題] 想請問一下有關subclone的方法

[microball (研究院路的紫薇花)]

※ 引述《jay0404 (yuga)》之銘言：
: 小弟想請問一下有關subclone有哪幾種方法
: 我目前知道的有
: 1.用enzyme將不需要部分去除再重新與vector ligation
: 2.還有用PCR將需要的insert夾出來在與vector ligation
: 這兩種方法想請問一下還有其他方法嗎??

現在有 gateway system 使用 DNA reconbination 的方法，
將某個片段 (兩端有特定的序列以供互換) 從一個 vector 換到另一個 vector

這應該是 Invitrogen 公司發展出來的
http://www.invitrogen.com/content.cfm?pageid=4072

他有一些限制：首先，target vector 也必須帶有相同的互換序列
生技公司會賣一些已經常用的 target vector 是帶有這些序列的
例如 GST vector, GFP vector 等等，
當然也有 TA cloning vector
(by the way, TA cloning 現在也有改用 TOPO vector 的技術，也是和互換原理有關)

等到接到 T-vector 後就可以用互換的方式 subclone 到 target vector
整個過程不需要用到 restriction enzyme
不過能 subclone 的 vector 有限就是了

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                      ~因為生活已經太複雜了
                              所以就讓我們的愛情單純吧~

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◆ From: 140.109.32.9
→ tyhong:應該要先先說明目的吧 再決定用何種方法比