※ [本文轉錄自 Biotech 看板]
作者: threestars (等待) 看板: Biotech
標題: [問題] 關於Semi-Dry transfer system 問題
時間: Fri Dec 22 00:01:50 2006
我們實驗室
主要使用semi-dry transfer system
配法主要是 5.82克的 tris
2.93克的 glycine
3.75ml的 10% SDS
200 ml的 methanol
加水至1L
廠商建議的電壓是30V 10分鐘 或15V 15分鐘 或 10V 30分鐘
想請教幾個問題，不知是否有人有經驗
1.methanol的量高於20%，會不會使得大分子的蛋白質轉不過去
2.SDS-PAGE 的%越高，是不是越難transfer
3.跑100kd以上的蛋白，transfer的電量是否要較高? (ex: >15V )
我知道如果methanol低於20%的話，不易使小分子的蛋白transfer
但是我們實驗室因為methanol是一大桶的，用到最後揮發很嚴重
無法準確的確認methanol的濃度
所以我配製的時候，都稍微高於200ml
我發現小分子都被轉過去了，但是大分子都還留在膠上
我以前常跑7.5%的膠，transfer大約15V 15分鐘 都可以完全transfer過去
最近常發現我使用高於12%或10%的膠，常常會發現transfer不完全的現象
我不知道是什麼緣故，如果是methanol揮發掉的話，電壓應該會跑不上去
但是現在電壓正常運作，卻無法完全transfer到我的memberance上面
這些情況都是偶發性的，
所以我懷疑是methanol的問題，還是SDS的問題?
因為glycine 跟tris 都是powder，應不會有存放上的問題
謝謝撥空看完我這麼長的敘述!
是否有人遇到與我相同的經驗?
現在開始考慮回去用濕式transfer了...
最近居然還有全乾式的transfer推出了
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如果活在世上只是扮演著大家所期望的自己
那扮演好了又怎樣
不如靜靜的讓自己消失吧
總是多餘的存在只是種荒謬的錯誤
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