Re: [問題] 蛋白質定量的檢測

[phenil (恩恩...)]

※ 引述《gordonliu (阿拋)》之銘言：
: 【問題】：
: 1.Folin-酚試劑法(Lowry法)
: 2.Bradford法(考馬斯亮藍結合法)
: 3.Bicinchoninic Acid (BCA)法
: 想請問以這三種方法來測量
: 同一個蛋白質sample
: 為什麼三種方法檢測出來的蛋白質含量都不一樣
: 測量的原理我大概瞭解
: 可是有沒有高手能詳細解釋一下
: 謝謝~

        我是低手，所以不能詳細解釋，XD.....

        為啥這三種方法測到的蛋白質含量會差很多呢？

        1. sample差異
        像是如果sample中含有chlorophyll a的話，
        Lowry assay會有干擾，倒楣的話可能會測到四倍高的含量，
        但其他兩種不會有太大差異。

        2. 實驗步驟
        像是以TCA去沈澱蛋白質的話會讓Lowry和Smith assay（你說的BCA法）
        所測到的蛋白質含量顯著的增高，但Bradford就沒有啥差異了

        3. assay本身的問題
        十多年前就發現Lowry有高估的現象（Smith也被認為有）
        而Bradford比較不會被sample中的non-protein compound影響，
        但要看你需要的方便程度還有sample決定你要用哪種方法

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◆ From: 140.112.52.216
推 vixen:能有這見解算是高手了
推 gordonliu:高手高手高高手
→ gordonliu:感激~