※ 引述《sancra.bbs@ptt.cc (新的開始)》之銘言：
> 嗯，我有想過假設三個是同向的話
> loxP ExoA loxP ExoB ExoC loxP ExoD
> 有可能的結果是，先delete ExoA，這時ExoB旁還剩一個loxP site，因此發生
> 第二次recombination，把ExoB、C一起殺掉，只剩ExoD
> 或先delete ExoB、C，再把ExoA砍掉，一樣只剩ExoD
> 或更直接，最兩端的loxP重疊，一次把中間的ABC全刪了，剩ExoD
> 所以同向代表一個很大段的deletion?
> 那如果有正向跟反向就沒辦法產生這樣的結果啦，例如上述例子，方向是正、正、反
> 如果先作用的是Exon BC兩端的loxP，則會變成anti-ExoC anti-ExoB，
> 再來是第一個loxP正向，第二個loxP正向，發生deletion，所以剩 anti-EC anti-EB ED
> 但還有一種可能是變成anti-ExoC anti-ExoB後
> 再來是第一個loxP正向，第三個loxP反向，再發生一次invertion，變成
> ExoB ExoC anti-ExoA??
> 因為這樣就會有錯誤(不只一種結果)
> 所以我認為我的想法是錯的，不知道版主大大指的排列組合是什麼意思??
> ※ 引述《sancra (新的開始)》之銘言：
> : 【問題】：3個loxP 會造成什麼結果
> : 【問題起因】：老師問的
> : 【個人看法】：
> : 我知道Cre-loxP的技術
> : 一個loxP sites會產生insertion
> : 二個同向的loxP sites造成deletion(knock out)
> : 二個反向的loxP sites造成invertion
> : 不過那三個loxP會怎樣，無法想像，是隨機delete嗎?
> : 還是會generate三種knock out construct?
> : 希望版上各位高手回答，或是告訴我參考資料來源，讓我自己看也行
> : 謝謝!!
排列組合的意思就是您最上面所講的
隨機剔除任兩個loxP site 所包夾的區域
這也是早先做condition knockout所用的方法之一
將ES cell 送入此一剔除載體後
先經正負選以篩選出已發生重組的細胞
再送入Cre表現載體
讓它隨機剔除lox P site所包夾的區域
會這樣做是希望可以先剔除正選擇所用的抗生素基因
而暫時保留原本的基因片段(exon)
而不是直接剔除整段基因(因有些基因一旦失去可能就會造成胚胎死亡)
最後再與組織專一性表現的Cre交配
以得到在特定組織內剔除特定基因的老鼠
不過要拿到自己想要的clone機率有點低
要多挑幾顆才會拿到想要的
不過現在的做法已經可再搭配另一種剔除酵素及序列
不用再花時間去篩選
starch
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┌┼ Origin: 國立台灣海洋大學˙海大計中 bbs.ntou.edu.tw
└┘ Author: starch 從 140-109-227-221.adsl.sinica.edu.tw 發表