推 bahnhof:要用PNK把尾巴磷酸化才接的起來 04/21 22:53
推 blence:或者既然用買的,就直接訂5'phospho modified的primer 04/22 01:35
請教一下各位大大有人用過這種方法嗎
我解釋一下用法
首先因為只要接76bp所以設計兩條類似primer的東西
不過他的長度為76bp加上Xho I的長度示意圖如下
Xho I C^TCGAG所以我們這樣設計
TCGAG.................................C
C.................................GAGCT
分別合成上股跟下股然後先將兩股各取大概1ug放在一起水加到20ul
加溫到95度5min 後用大量的衣服包起來使其溫度緩慢的下降
約降至室溫時就可以做ligation了
我所說的就是這個方法請問有人用過還有什麼注意事項嗎????
ligation成功率又如何呢???
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