作者jaycao (風一吹特別冷)
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標題Re: [問題] 請問PCR...
時間Wed Apr 26 00:52:12 2006
※ 引述《myy720 (永遠的畫面)》之銘言：
: 1.是否可以說明對照模板(control template)如何檢測PCR反應條件是否成立,
: 即反應確實可進行?
: 我記得PCR反應條件為:?94℃作用1分鐘?55℃作用1分鐘?72℃作用1分鐘,
: 同條件反覆作35次?72℃作用10分鐘。總反應時間約2.5小時
: 請問要如何檢測呢?
陽性control拉得出條帶就說明反應體系和條件沒問題，沒拉出就肯定哪有問題了
陰性control拉出條帶，就說明你的反應體系被污染了
另
進入循環之前要先94度預變性數分鐘
其余反應條件也應該隨模板和引物的不同而不同，尤其退火溫度和延伸時間
: 2.TaKaRaExTaq?是否可由其他DNA合成酵素如DNA polymerase Ⅲ取代?
可以用KOD pfu等DNA polymerase代替，看需要了，基本上各有各的好處
polymeraseIII好像沒有人拿來做PCR吧，沒聽說過
但要講為什麼不可以
我就不知道了
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◆ From: 202.127.20.26
→ jaycao:internal control是用來比較不同樣品之間加樣量是否一樣 04/26 00:53
推 starcindy:一般的DNA polymeraseIII不耐高溫，不能用在PCR吧! 04/26 02:13
→ starcindy:Pfu和常使用的Taq不一樣是他是3'->5'exonuclease 04/26 02:15
→ starcindy:Taq做出來的product都會再加上polyA tail, Puf 則否 04/26 02:16
→ starcindy:每一種polymerase在95度C的半衰期也不同 04/26 02:17
→ jaycao:pfu與Taq主要區別是擴增能力和保真度，加不加A，除非你連T 04/26 23:22
→ jaycao:vector，否則沒關系的 04/26 23:23