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作者euphorbia (where to go)
看板Biotech
標題[問題] 刮細胞要用cell lysis buffer(RIPA)或PBS就好?
時間Thu Apr 27 01:59:08 2006
刮細胞時是應該加入RIPA(含protease inhibitor)再刮,還是先用PBS刮下來 收集至離心管後,移去上清液,再加入RIPA(含protease inhibitor)? 若先加入PBS來刮細胞,會不會因為尚未加入protease inhibitor於PBS, 使得在刮細胞過程中,因為細胞破裂,導致protease釋出而分解破壞protein? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.113.68.94
推 asthma:PBS須加proteinase inhibitor cocktail 這樣應該回答問題了 04/27 02:29
推 ghjkl:理論上刮細胞不太會使細胞破裂或說破的很少 04/27 08:59
→ ghjkl:所以才能夠刮下來之後離心再用RIPA將細胞打破 04/27 09:00
→ mandible:PBS不一定要加PROTEIN INHIBITOR阿 04/27 14:31
推 pj0611:性的刮細胞方式還是很難避免不會有細胞破裂..我贊成要加 04/27 16:56
推 blence:我不了解,PBS用來wash與resuspend,既然後面有個步驟要離去 04/27 20:28
→ blence:上清液,那破掉的細胞以及released protease也會在這個步驟댠 04/27 20:30
→ blence:被移走了呀,如果擔心有影響,多用PBS洗一次或動作快一點應該 04/27 20:31
→ blence:就可以解決了吧?(有些lab是用trypsin收細胞,那不是更危險?) 04/27 20:32