推 shunze:試試gradient PCR 尋找黏合最佳溫度 05/23 18:25
推 pj0611:沒錯...有可能是annealing temp不是最適溫度...提高一點試렠 05/26 17:06
hi hi
之前post這請教各位有關萃DNA的問題 後來我的DNA OD260/OD280 皆
在 ≧1.8以上 也就是DNA/RNA 的純度夠高了
因此我已經確定了 萃DNA這步驟應該是沒有問題了
接著跑 pcr 問題也都可以解決了 也沒有再看到smear的問題了
但是 套在其它的細菌就又出現smear （DNA純度1.8以上）
我開始懷疑是不是primer 的問題
但如果是引子的問題 應該不會有的菌不會出現smear 有的菌卻出現了
我的primer 的濃度是5μM 取1λ 總體積是50λ
DNA 是 10μg/ml 取 1λ總體積是50λ
anneling 55℃ 30 cycle
Taq 是 Protech
麻煩各位熟悉PCR的前輩 給我建議
感激不盡（快被鬼DNA搞死的阿呆鬼~~~~嗚)
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