推 oplz:HURP 這個 protein 真的是被周成功黃奇英這幫人給做壞了 可惜 07/01 06:41
→ oplz:結果現在被人家發現真正重要的功能 開始紅 周黃只能撿剩的 07/01 06:42
※ 引述《KECCO (誰幫我保養車子~)》之銘言：
: 我最近從cell extract membrane protein後~
: 利用western blotting去偵測....
: 因為我的membrane protein是一個glycoprotein~
: 另外
: 又因為是membrane protien~所以比較hydrophobic~~
: 我怎麼跑膠~怎麼transfer~
: ""band""都是糊的....band都很胖....
: 有人 有什麼小撇步嗎?!
: 加什麼特別的detergent會好點嗎?!
: 懇請大家幫忙!!
我以前做的題目是transmembrane receptor protein(但不知有沒有被glyco就是了).
在做western blotting的過程中, 並沒有遇過像您這樣的問題.
通常收cell lysate時, 一些detergent如NP-40, tritonX-100, 都足夠把cell membrane
上的lipid 從 membrane protein 上頭分開, 而在denature ( 加sample buffer 去煮)
時, protein應該都 unfold, 不會有hydrophobic的問題. 至於glyco的東西, 我就不清楚
了.
請問您收細胞的方法跟reagent為何? 用同樣的步驟方法跟reagent去看其他的蛋白質(不
一定要membrane protein), 也會在Western blotting 上頭看到糊糊的Band嗎
我有時會在Western Blotting有這樣糊糊的band, 通常是因為一時晃神, 把buffer
搞混了. 不過你說band很胖, 會不會是protein loading 得太多了?
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