[問題] PCR不成功的因素？？

[tzuling0815 (豔陽天.晴)]

        專題實驗一直在做 PCR 跑膠..
        但是沒有一次成功...
        換過primer，重新設定過PCR的溫度
        連老師自己操作都做不出來～
        跑膠後甚麼東西都看不到...到今天已經失敗第5次了..

        想請問大家，有麼因素是會影響PCR的結果嗎？
        （目前我們也懷疑是 水 的純度不夠高）

        順便問一下嚕～有沒有甚麼好的網站可以協助我們設計primer呢？
        （國家衛生研究院嗎？）


                                                            謝謝嚕！

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   我的小小天地～
   http://www.wretch.cc/album/tzuling0815

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 218.168.133.38
推 havenn:加DMSO?
推 meiosisLin:察看GC值，GC太高可以加DMSO試試看..不要超過總體積5%
→ foxrose:dNTP, buffer或enzyme 等等都有可能出問題
→ foxrose:可以一個一個去試 看問題在哪 不然就全部換新囉
推 chiehgriffin:template是甚麼呢？
推 oscarcc:我知道有個軟體vector NTI可以分析序列.設計primer
推 artistic:cycle數不對.我之前30cycle跑不出來.變35cycle就出來了
推 melodyrabbit:若是RT-PCR的template,quality夠好嗎?若從plasmid或
→ melodyrabbit:cDNA library,template再稀釋到500,1000倍試試