Re: [問題] 有關commercial plasmid的問題...

[aggaci (有氣質的台客)]

※ 引述《siberianiris (紫色鳶尾花~)》之銘言：
: 今天學姊問我一個關於commercial plasmid的問題
: 他從別的實驗室要到一種買來的plasmid
: 產品網址如下:
: http://www.stratagene.com/products/showProduct.aspx?pid=471
: 就是上面網址的PathDetectR Cis-Reporting Systems
: 其中的 NF-kB Cis-Reporter Plasmid
: 他問 自己在E coli複製大量後 怎麼去確認？
: 就是問說 要用哪兩個restriction enzyme去切下insert？
: 我有看完整份說明書 但是沒有找到他是用哪兩種RE...
: 而那個plasmid只有找到map... 還有vector的序列而已...
: 想請問板上的學長姊是否知道該怎麼去查？
: 先說聲謝謝 希望可以給小的一點點指示...
: 很想知道 但是想不出來>_<

  通常不是這樣check...
  我看你應該是要看NF-kB活化的情形
  但是你不知道這個plasmid能用否?
  要怎麼知道?
  做個positive control不就得了?
  通常是用LPS...

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◆ From: 140.114.100.165
→ aggaci:而且買來的通常不會有錯，尤其是向Strategene這種大廠
→ aggaci:真要check，設primer定序，看是否跟廠商說的序列一致
推 siberianiris:我看vector map上MCS中有6個RE切點...那如果是原本廠
→ siberianiris:商賣的plasmid MCS部分是整個被enhance element置換
→ siberianiris:掉嗎？^^"
推 jsi:用RE check plasmid是簡單而常用的方法之一
推 jsi:通常insert是塞進MCS之中 不知道這樣提示是否可以想出如何切
→ jsi:出insert? 原po的問題是學姐給的回家作業嗎?
推 siberianiris:對押 可是買來的plasmid上 我找不到是那兩個RE切點
推 siberianiris:不是作業 是學姊實驗上遇到的問題 他們已經解決~
→ siberianiris:但是我有問怎麼解決 可是學姊說太複雜我不需要知道
→ siberianiris:可是我還是很想知道^^:我不好意思一直多問~