推 Fourfish:太濃？ 我現在PCR也撞牆中....Orz 08/15 20:41
推 melodyrabbit:比較像是cDNA quality不好,再純化乾淨一點試試看? 08/16 01:12
推 tonyroro:有使用過其他家的KIt 嗎?? 好像是cDNA 08/16 11:18
推 summersnow32:那如果是cDNA的問題話，如何更加提高純度~~謝謝 08/16 17:46
這個星期小弟跑了不下十次的PCR
跑的都是GAPDH有時會跑AHR
但是一直都是BAND伴隨著SMEAR
有時甚至沒有BAND只有SMEAR..
於是乎在下卯起來TEST....
分別試過了以下condition(每一次都是血和淚):
1.拿別人的cDNA來跑-也是時有時無但是必有SMEAR...殘念...
2.換一個taq-還是殘念...
3.換buffer-殘念...
4.調高Tm-....Orz...
5.配新primer-...快哭了...殘念....
6.狂抽新RNA-O.D值爆好....但是依舊PCR...殘念....
7.全程4度C保鮮-....殘廢了..
8.降低cycle數....腦殘了...
9.換台機器-....直接ko...好慘...
etc...
以下是還沒有試過的
1.RT-PCR的cDNA quality test-是這個錯誤嗎?可是他人的cDNA也是降子
2.用更高級的taq-目前是用geneaid的
3.treat香灰泡符水.....天阿....難道只有你能幫我了嗎?
4.去拜拜...告解...我沒有做過壞事阿...不....
5.還有什麼遺漏的嗎?
各位大大...救救小弟我吧...把我從PCR煉獄解救吧...
阿里嘎多...THX...三碗豬腳...拜託拜託....
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