推 ZecAhau:SAP? 08/15 22:16
推 intotheman:CIP之類的去磷酸根? 08/15 22:54
推 Fourfish:對 去磷酸根 08/15 23:35
推 Duckhunter:有可能～合理～ 08/17 10:56
推 kirry:SAP 從SHRIMP 萃取出來的 08/19 23:45
我之前也有做後續的ligation 也沒成功...
昨天跟我學長討論了一會
發現可能是因為double digest的兩酵素切位太相似（查過 的確蠻相似的）
且elute過程中的buffer變化
使得DNA產生幾個bp的自接 形成circularly form
為了自接 DNA產生些扭曲 像supercoil的結構
在電泳時跑得比較快 所以判斷起來變小了
為了確定以上推論 今天RE切的時候
多添加了SAP 減少自接
並經相同elute的步驟
電泳結果確定大小真的沒改變了！
這樣的推測各位覺得合理嗎@@?
※ 引述《MegaFire (怪走該)》之銘言：
: 我之前作也有這樣的狀況
: 因為我作的是promoter的部分，所以學長認為可能形成一些2ndary structure
: 我把elution product拿去加熱到65度10分鐘後放回冰上
: size的確有恢復
: 但是冰到-20下次用的時候又變小了...
: 而且，ligation還是不成功
: 所以不太確定到底是什麼原因造成的
: 老師覺得是水太酸，DNA都斷掉了，可是又斷得太整齊了吧！
: 後來用kit附的elution buffer就解決了
: 不過還有一點奇怪的是，最近用水去elute又很正常了
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◆ From: 140.127.215.12
※ 編輯: Fourfish 來自: 140.127.215.12 (08/15 20:44)