推 csmceddie:為什麼這方法不會有supercoil的問題阿?? 08/22 23:20
推 ROKEE:rapid screen? 很難用= = 建議還是乖乖抽plasmid 08/23 20:36
→ ROKEE:反正現在plasmid isolation很便宜吶 XDDDD 08/23 20:37
※ 引述《Duckhunter (Duckhunter)》之銘言：
: 是有專門給GC rich序列使用的 PCR polymerase
: 不過那會比你用限制脢來的更貴上10倍
: PCR做不出來
: 用限制脢已經是很便宜的方法了
: ※ 引述《aggaci.bbs@bbs.wretch.cc (來吧~五子棋)》之銘言：
: : 請問一下
: : 大家的ligation check的方法都是什麼?
: : PCR check?digestion check?
: : 我最近clone 1個基因(1.5kb但是GC rich)到pcDNA3上面
: : PCR check都check不到
: : (enzyme應該沒壞，因為空的vector有amplifiy的fragment)
: : 挑個幾顆去做digestion check，
: : 本來PCRcheck沒東西的，digestion check卻有......
: : 我是覺得應該有接近去只是PCR沒辦法做出來.......
: : 不曉得有沒有其他的方法可以confirm
: : 因為RE的酵素也是挺貴的！
學長有說一個方法
有用到phenol-chloroform
onernight culture=>離心=>pellet以phenol+chloroform+DNA dye溶解
=>離心=>supernatant 取 15 micro-liter跑電泳
直接看有接insert和空的plasmid size大小
命中率100%...(不過聽他說這方法不會有supercoil的問題)
謝謝各位
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.100.165