推 aggaci:是阿，用這個方法條件是insert不能太短 08/22 23:17
推 sktzy:短的insert可用兩端酵素不同的載體 設計成一端酵素如果有 08/23 01:29
→ sktzy:insert 則切不動 所以之後用兩種酵素分別check 08/23 01:34
→ sktzy:如果 一個有切動 一個沒有 就表示有clone成功了 08/23 01:34
※ 引述《aggaci (Desperado)》之銘言：
: ※ 引述《Duckhunter (Duckhunter)》之銘言：
: : 是有專門給GC rich序列使用的 PCR polymerase
: : 不過那會比你用限制脢來的更貴上10倍
: : PCR做不出來
: : 用限制脢已經是很便宜的方法了
: 學長有說一個方法
: 有用到phenol-chloroform
: onernight culture=>離心=>pellet以phenol+chloroform+DNA dye溶解
: =>離心=>supernatant 取 15 micro-liter跑電泳
: 直接看有接insert和空的plasmid size大小
: 命中率100%...(不過聽他說這方法不會有supercoil的問題)
: 謝謝各位
用這個方法時agarose膠的percentage要高一點...不然會分離不出來...
要記得跑control組...不然會不知道怎麼比
此外..我不太清楚這方法是不是有適用於一些特定的host...
我只知道以前作都做的出來...現在到新的實驗室後用這方法卻都做不出來..
囧囧囧...
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