[問題] western blotting壓片時的問題

[licary (看不見的真實)]

最近 壓片的時候發現 壓出來的 常是空白片

原本以為真的是空白的

但是 後來才發現 原來是ECL加進去後 decay太快

所以 每次在ECL作用後 在暗房 可以看到membrane上該有的位置

有很亮的光

但是 當我把底片拿出來後 就可以看到 那個"光"

很快的就消失了 = =" 然後 就壓不出東西了

如果動作再快一點 其實 是可以壓出很黑的band

但 是 儘管我的動作再快 壓完一張 就沒法壓第二張了

所以 就得再重加ECL....

原本以為是ECL有問題 但 買了新的 還是同樣的情形

用不同的一抗 也一樣

會是二抗嗎？ (好像也有換過 我明天再確定看看)

因為這個星期 所有的結果都是這樣 > <" (之前不會這樣)

還是wash buffer有問題呢

請問 有人有好的建議 或覺得是那個步驟出了問題呢

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◆ From: 59.104.78.194
推 alaric:ECL你是用哪家的?
→ alaric:我的, 都還可以O/N再壓, 當然時間要拉長些..
推 mandible:ECL有問題吧!建議用PIERCE或是AMERSHAME或是MILLIPORE
推 linker0726:二抗濃度會不會太高? 1:2500? 1:5000?
推 jsi:有可能是二抗太濃
推 threestars:不要用Santa Cruz ECL 壓一次壓不了第二次
推 u8524009:我也建議不要用Santa Cruz的ECL....decay超快的..
→ u8524009:雖然比較便宜.不過真的很爛..建議用騰達行的PIERCE 的ECL
推 licary:我用的是伯森的
→ licary:二抗的話 從1:2000~1:4000都有試過 情況好像一樣
推 threestars:伯森ECL  算很好了 應該有一小時以上