[問題] 請各位大大幫忙

[armyguy (～我們就是有分別)]

請問在PCR的分析方法中
跑gel 時看到的結果是有自己的product, 但也出現primer dimer的情況
嘗試過以2倍2倍dilute primer來做, 如5uM, 2.5uM, 1.25uM.......
發現自己的product和primer dimer的強度也隨著primer concentration的下降而變弱
那請問要如何改善才可解決primer dimer的問題呢
是否增加annealing temperature 會增加affinity而減少這樣的情況
或是延長denature temperature 的時間會不會有幫助呢
以上是我想到的方法
因為primer dimer 會影響定量
我們老師不接受這樣的data
我正在煩惱中
請各位強者可以提供我一點點的意見
感激不盡~~~

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.129.74.69
推 aggaci:redesign primer
推 Solow:提高annealing temperature，或用gradient PCR抓條件
推 satantaco:減少cycle數試試
→ mandible:可以加DMSO!(破壞hydrophobic interaction)不過建議1F作
→ mandible:的作法!!重新設計比較不浪費時間.建議你PO出條件.
推 armyguy:因為是在抓條件,所以在95-30s,53-30s,72-30s,40cycle
→ satantaco:除分primer Tm低,不然53可以再提高些