推 hychou:請問是否因為spectrophotometer只能測pure DNA or RNA? 11/20 13:17
推 aggaci:dNTP也會吸光 11/20 14:39
推 hychou:謝謝前輩的指教(恍然大悟貌) 11/20 15:24
推 Solow:O_O 原來是這樣啊…… 11/20 18:49
※ 引述《hychou (布丁)》之銘言：
: 板上的前輩們好,
: 最近在進行RT-PCR,所用的RT為invitrogen的superscript III
: RT前我先測了total RNA濃度後,以5ug RNA去RT (reaction vol.=20ul)
: RT結束,我取1ul cDNA來測濃度, 100x稀釋 OD260=0.299
: 其濃度計算是否為0.299x40x100=1.196ng/ul
: 這樣算的話cDNA不就有1.196x20=23.92ng @@(昏)
: 請問前輩們,究竟哪裡出了問題?
: 我用random primer來RT,應該不會有影響吧?!
: 另外,這批RNA的ratio大概都在1.6左右,
: 這樣是否會影響之後的real time PCR反應?
: 我最煩惱的是standard curve是否會做不好?
: 謝謝大家幫忙!!
RT後的cDNA應該無法測cDNA濃度！
您想一下ribonucleotide測濃度原理即知
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.100.165
※ 編輯: aggaci 來自: 140.114.100.165 (11/20 12:20)