Re: [問題] 關於Inclusion Body的純化

[snowtree (blue eyes blue)]

※ 引述《ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)》之銘言：
: ※ 引述《brigand (台灣加油)》之銘言：
: : 我的蛋白質已經不可能形成Native Form
: : 所以純化Inclusion Body是我唯一的選擇
: : 我的Protein 是 GST-fusion protein
: : 是使用 Glutathione Sepharose 來結合然後沖提出來
: : 想請問板上的大大們
: : 如果我的Inclusion Body是溶在 PBS + 8M urea + 10mM PMSF 的環境下
: : Glutathione Sepharose 的 binding 能作用嗎?
: : PMSF 跟 Urea 是否會影響 binding 呢?
:    基本上 GST 是和 Glutathione Sepharose (以下簡稱resin)
:    上的 10 個 C 原子結合，藉此和其它 crude 分開
:    如果你的蛋白這麼「頑劣」，甚至接在 GST 後面還不可溶的話
:    那麼上述的這套方法並不適合你使用
:    因為你的 system 含有 urea，換句話說，連 GST-tag 都被 denature
:    那 resin 要認什麼?


        如果po 的protein 是his-tag 的 是沒問題

        用denature bfr 處理後 使inclusion body 回溶

        在去純化 跑sds 是可以看到protein的

        GST-tag 的話 就不太行了 純化後蛋白的量一定很少很少

        甚至純化不出來  而且你接下來的實驗

        如果是需要native的蛋白 那如何去refolding

        又是一個問題






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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.120.131.122
推 ROKEE:他都已經說要用GSH resin純化了,哪又有扯到His-tag??
→ ROKEE:又，SDS-PAGE就SDS-PAGE，什麼叫做"跑sds"???
推 snowtree:你推文有必要這麼無禮嗎 我只是提出我的看法 在兩種不同ꨠ
→ snowtree:情況下 會有怎樣的結果 跑SDS-PAGE 我打成跑sds 괠
→ snowtree:可以讓你這麼憤世疾俗嗎  學習怎麼去尊重別人吧你
推 ROKEE:抱歉我的用詞讓你誤會我的意思
→ ROKEE:但是科學不就該是用精確的用詞嗎?寫那種跟注音文差不多的..
→ ROKEE:字句很容易讓跟入門的新手誤解