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his-tag 的特性就是會 bind Ni (鎳) NI-NTA 是帶有 Ni 的樹脂顆粒 把 cell lysate 跟 Ni charged resin incubate 一段時間 (或者是過 column) his-tagged protein 會黏到上面 wash 以後再用 low pH buffer 來 elute 就可以得到純化的蛋白質 Urea 是用來 denature 蛋白質的 低 pH 值則可以干擾 his-tag 跟 Ni 的 binding -- 莫非定律: 到了期末才會想起期初曾選了一門課卻一直沒去上 補充定律: 拿到成績單才發現上了一學期的課忘了去考期末考 -- ※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: ppp-70-227-5-184.dsl.bcvloh.ameritech.net
mindy27:還有用較低的PH BUFFER 雖然ELUTE效果較好 12/09 22:17
mindy27:不過protein卻容易degraded,可以用較高pH buffer來平衡 12/09 22:18