推 mindy27:防止degrade的方法 低溫 或是你用低pH buffer elute下來 12/10 02:34
→ mindy27:後再添加一些較高pH buffer將pH值提高為中性 12/10 02:35
推 mindy27:至於urea與SDS-PAGE上的protein關係很多地方都可以找到 12/10 02:43
→ mindy27:可以嘗試自己找找看 收穫會比較大喔.. 12/10 02:44
※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言：
: his-tag 的特性就是會 bind Ni (鎳)
: NI-NTA 是帶有 Ni 的樹脂顆粒
: 把 cell lysate 跟 Ni charged resin incubate 一段時間
: （或者是過 column）
: his-tagged protein 會黏到上面
: wash 以後再用 low pH buffer 來 elute 就可以得到純化的蛋白質
: Urea 是用來 denature 蛋白質的
: 低 pH 值則可以干擾 his-tag 跟 Ni 的 binding
請問urea是要用來denature protein的用意
是否是要讓protein變成線狀好跑SDS-PAGE來分析?!
還有阿..
如果說低pH的urea buffer 易讓protein degrade 掉
不易純化出來
我要怎麼用高pH解救我的protein?!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.151