作者shuo218 (快樂的理由)
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標題Re: [求救] 抽pasmid的量都好少
時間Fri Dec 15 22:32:51 2006
※ 引述《bloodgas (奶油ˊ的夢)》之銘言：
: ※ 引述《shuo218 (快樂的理由)》之銘言：
: : 最近在抽plasmid 因為我們實驗室是第一次接觸細菌的實驗
: : 雖然照protocol下去做 可是抽完的濃度都少的可以
: : 下面是我的protocol 還麻煩大家可以幫我解決這個問題
: : 1 colony of successfully pGL-transformed E.Coli to 10ml prewarmed LB+ (in tube)
: : Incubate o/n (16H) 37°C 60rpm
: : 一次培養2管，然後將兩管倒在一起成20ml
: : Centrifuge the 20ml culture at 10,000g x 5min
: : 接下來的步驟都是照promega的protocol做的
: : 不過最後我們是用40ul回溶 因為上次用100ul覺得量太少
: : 結果今天做出來量更少 大概只有0.0125 ug/ul
: : 實在不知道是哪邊出問題
: : 因為後面要切 然後ligase 回收 再送到E.coli
: : 可是前面的量就很少 後面好像根本就沒辦法做下去
: : 大家有什麼好的方法嗎?謝謝!!
: 想先請問一下實驗的細節..你是用什麼管子養菌的,第二個問題是,
: 請問你是用哪一種column抽DNA
1.我是用高速離心管直接下去養的耶，這樣可行嗎?
2.我用的column是跟promega買的
他的kit是這個名字WizardR Plus SV Minipreps DNA Purification System
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◆ From: 220.140.37.184
推 aggaci:promega抽plasmid這組我們lab覺得超難用，原因也是量太少 12/15 22:54
→ aggaci:後來用invitrogen的，真是讚 12/15 22:55
推 bluejelly:I have similar problem with Promega kit too!! 12/16 00:46
→ bluejelly:I just couldn't have enough yield for cloning 12/16 00:48
→ bluejelly:I shortened the incubation time to 14hr but in vain 12/16 00:50
→ bluejelly:I also tried high copy number pUC19. Same result 12/16 00:51
推 Liebesleid:不要用高速離心管養吧... :P 用tube喔 12/16 15:18
推 bluejelly:對啊 我用tube喔~ 12/17 00:24