推 redhawk:不不不, 酒精會影響PCR沒錯, 但是QPCR太靈敏, 層級不同 12/16 14:44
→ redhawk:最好是重新抽一次RNA, 會這麼說是因為我們有人碰過類似問쌠 12/16 14:45
→ redhawk:我想ABI的鄭小姐應該會同意我的說法 12/16 14:46
推 a64toto:不是徐玉君媽 12/16 15:03
推 dlink:ABI的specialist很多呀 12/20 01:54
這我知道阿...但酒精真的有影響到我的cDNA...
應該連PCR都做不太出來阿!!!
其實我是在猜機器或試劑有問題....
反正我現在頭大了阿!!...
red大是建議我把cDNA再通一次column..把酒精洗淨嗎?
※ 引述《redhawk ( )》之銘言：
: ※ 引述《lakerjackt (NN )》之銘言：
: : 哈....這是事實.....
: : 我的cDNA目前真的PCR做的出來....用的primer還是用跨intron的...
: : 但real-time就是做不出來....
: : 所以我才頭大阿!!!
: : (ABI廠商是說我cDNA沒轉好..但我cDNA就是有轉成功阿...
: : 就一直說我的cDNA不夠純...所以請各位救救我
: 基本上,的確是PCR做的出來的,q-PCR也應該要看到結果
: cDNA的純度真的很重要, 不只是在轉cDNA的過程
: 先前準備RNA的步驟也有很大的影響
: 尤其是處理酒精的步驟, 不夠乾淨俐落的話, 是會影響深遠的^^"
: 另外, 不知道你轉cDNA是用OligodT或是random hexmer呢?
: 這個對你要看的是什麼基因也會有影響
: 不過目前我覺得酒精去除的不夠乾淨應該是主要原因之一
: 你可能需要重新Isolate一次會比較好
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.169.117.86
※ 編輯: lakerjackt 來自: 218.169.117.86 (12/16 14:33)
※ 編輯: lakerjackt 來自: 218.169.117.86 (12/16 14:35)
※ 編輯: lakerjackt 來自: 218.169.117.86 (12/16 14:36)