推 bluejelly:我用過pUC19 pGEX pET pEGFP pGKBT7 pGAD 全都一樣結果 12/18 21:40
→ bluejelly:最近有genoomic DNA是pET pGEX pEGFP 應該不是質體的錯 12/18 21:41
→ bluejelly:而且是>10kb有跑不下來的band 不是smear 12/18 21:42
推 puec:這就真的是奇了～換kit吧～ 12/20 12:42
請問你是transform什麼樣子的plasmid進去E.coli。有時候E.coli遇到不喜歡的
plasmid產量就會很少，就算是你增加體積，抽出來足夠的plasmid以後，用enzyme
切過就會出現smear!!我猜你的plasmid可能很大，所以一看到smear你就以為是genomic
DNA 污染。smear產生的原因是因為kit抽出來的dna不夠純，帶了一些dnase。為什麼？
因為E.coli不喜歡嘛。
建議你可以去別人家借借看其他牌子的kit抽抽看，我猜結果應該是一樣。在我手上
的plasmid都是超不穩定的，就算是用qiagen抽，一切，還是會有smear。但是我發
現MN (前clontech)的nucleobond抽出來的plasmid相當乾淨，並不會有上述問題。
如果你的plasmid真的很大的話，記得用高溫(60度左右)的熱水去elute，可以提高
產量。
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