推 slowmove:推~如果是要做ab的就沒差啦 直接用urea buffer denature 01/04 13:31
→ slowmove:然後用Ni beads去抓就可以了 01/04 13:33
→ slowmove:另外 600? 最近過的還好吧? 01/04 13:35
推 boblu:還行啦 用推文聊天會不會不太好` 01/17 11:12
看你前面描述的內容
你的這個 construct 表現出來的蛋白質是沒有任何 tag 的
我個人的看法是 作抗體的用的蛋白質 既然不在乎folding 實在沒有理由不帶 tag
會建議你重新 construct 一個帶 his tag 的
有幾個好處：
affinity purification 出來的東西純度通常比單純的 wash 高
（也可以結合兩者 更好）
his tag 可以在 denature 的狀況下與 Ni binding
可以用 western blot (1st Ab: anti-his) 確認最後產物的純度
如果這樣做了 最後純化出來還是有超過一種分子量的產物
但是只要在 western blot 上都可以 specifically 被 anti-his Ab 認到
那我會相信這些可能只是 degraded form, 還是可以拿來生產抗體的
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另外 事實上打老鼠不一定要那麼純啦
反正打老鼠時間不長 成本也不高（跟作monoclonal相比）
只要純化出來的東西 想要的那種蛋白質佔有明顯的大比例 其實就可以用了
打兩次以後取血樣 用來染 control/overexpressed cell/tissue
效果好的話就是一支堪用的 polyclonal 了
甚至就算不太滿意 還可以再用 pre-clean 之類的方法純化抗體
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莫非定律:
到了期末才會想起期初曾選了一門課卻一直沒去上
補充定律:
拿到成績單才發現上了一學期的課忘了去考期末考
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※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: adsl-65-43-230-142.dsl.bcvloh.ameritech.net