推 kitiara:顆粒多大?? 太大會讓細胞碎掉 不過有些堅強細胞會沒事 01/08 00:52
→ kitiara:阿 你用懸浮細胞喔 這方式只能用在Attachment cell喔 01/08 00:54
→ kitiara:回文好了 01/08 00:55
我們實驗室以前沒有做過stable line transfection
由於沒有 electroporator，想說先試試看 calcium phosphate的方式
我的細胞是 suspension 的，但仍有部份會貼在 plate 上
我是用 10cm dish 做，10 c.c. medium，15% serum RPMI
加入 DNA 之前細胞狀況 OK
加入後看到很多黑色小點點
兩個小時以後細胞就全死光了 (找不到一顆活細胞)
我的做法大致如下
20ug linear DNA in 450ul 0.1X TE
+2X HBS 500ul
+2.5M CaCl2 50ul
通入bubble 15min
室溫靜置 40min
一滴一滴加入 dish 中
請問各位有經驗的前輩們
(1)黑色點點是不是致死的原因呢？
(2)若排除藥品濃度錯誤 (我有找其他同學幫我 check 過，應該沒配錯)
還會有什麼可能性呢？
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