推 cyken:cell extract ? soluble fraction? 破菌後有離心取上清嗎？ 01/11 00:49
已修正 THX!
※ 編輯: iceoo 來自: 61.230.71.161 (01/11 00:59)
※ 引述《iceoo (醉心於巴黎)》之銘言：
: 請問一下 在用imidazole洗純化之蛋白質的時候
: 因為用1M imidazole去洗還是得不到我要的蛋白質
: (用SDS-PAGE沒壓到 但pri-bind有壓到)
: 所以就再提高imidazole的濃度 當提高到2M時
: 在洗的過程中 帶有Ni2+的 resin逐漸由綠色轉為紫色
: 請問是為什麼呢 我再用PBS wash後 又恢復成綠色了
: thx!
推 Bluecold:pH? 01/10 06:49
推 aggaci:沒結合上去吧?通column前後，target protein量有改變嗎? 01/10 14:19
推 wensing:用到1M imidazole相當高濃度！ 01/10 18:00
→ wensing:我只用300mM就可以洗下來了！ 01/10 18:01
推 alaric:你的cell extracts有表現? 01/10 21:27
謝謝各位的回答 應該有結合上去 我的蛋白質是可溶的
破菌後上清液(un-bind)是有表現的 菌液用column bind O/N後 流出來的液體(pri-bind
)target protein量有變少很多(coomassie和Western都一樣結果 雖然很難
去估計pri-bind和un-bind load的protein是否等量)
所以我推測應該是有bind 只是沒沖下來...而且column為什麼會變成紫色呀
我有去找可是找不到答案 很詭異...
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莫聽穿林打葉聲，何妨吟嘯且徐行。
竹杖芒鞋輕勝馬，誰怕？一簑煙雨任平生。
料峭春風吹酒醒，微冷，山頭斜照卻相迎。
回首向來蕭瑟處，歸去，也無風雨也無晴。
~~~《定風波》~~~
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