[問題] 請問有人做過 in vitro trascription & translation 嗎?

[keiny (lav dolce vita(分生所))]

Q1: 有大大做過這個實驗嗎?
    我想請教其中的細節

Q2: 還是有其他更適合的方法
    (看unmodified form proetin 之 expression 情形)

{前情概要}

小弟正在做這個實驗(In vitro transcription & translation)中
http://www.promega.com/pnotes/60/6079_07/promega.html
目的: 要看在很少modification的環境下
      我的protein的表現情形

(註) 我是用S35-Met label 的

我要表現的DNA (約1800bp) construct在pet15b的vector中
因為它有T7 promoter
手邊又剛好有
http://www.genomex.com/vector_maps/pet15bm.pdf



{慘狀}
不過我照著protocol做了幾次  壓了幾次片子
都沒有看到我想看的protein !!
只有一些background band(compare with control:沒有放入任何DNA的Reaction !!)

懇請諸君給予建議
感激不盡~~~~

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.109.32.9
推 nightcatman:我用Roche的做過,按照說明書一次成功,不過Roche的很貴
推 lolity:Kit裡面應該有提供control plasmid，先確定不是kit的問題。