→ ROKEE:補充一下,native PAGE不用做stacking gel 02/06 13:27
推 freshing:native gel 似乎也有人在做stacking ～ 供參考 :) 02/07 07:38
※ 引述《philesazumi (苦悶阿)》之銘言：
: 我家 acrylamide PAGE是用 biorad的mini protean 3 cell
: 這個系統，厚片玻璃是8cm X 10cm，我要看protein native form的大小
您的膠片厚度是? 0.75? 1.0? 1.5? (mm)
小弟我有點好奇，請問你們家有可以看native form分子量的marker嗎?
還是說用另外一個已知分子量的蛋白當比較基準點?
: 所以不能用SDS，我有用google收尋過，有找到兩個recipe
: 其中一個和current protocol內的一樣，但這兩個試的結果，
: 都因為過熱而玻璃破掉（我有放在冰箱裡面跑，電壓也才30V，跑O/N）
: 求適合我這個系統的recipe以及protocol
我的經驗是整個tank都放在大冰保裡，裡面灌滿冰塊(記得要死命壓實)
不含SDS的running buffer當然是用先冰過啦
跑的時間大概是一般跑denature form的至少2.5倍以上
基本上我用的 PAGE 跑膠系統跟你一樣，所以應該可以做出來 :DDDD
不過您的情況是熱到玻璃都「烤」破，小弟我有點難以想像耶
(OS:tank裡就跟溫泉一樣冒煙?那tank怎麼沒先融掉?)
: 用NT$1000元整跟你買...........................緊急
: p.s. 要確定能用我才出錢...我可以假日到你的地方試能不能用
用PAGE看native form分子量其實準確度並不是很好
(當然是要看您的目的和用途啦)
打個gel filtration不就省了這些麻煩?
至少玻璃不會破 XDDDD
(原廠玻璃 - 厚：$500/片，薄：$220/片)
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