推 Adler:insert已經接到TA vector上,再從plasmid上切insert 02/12 20:19
→ Adler:plasmid用的濃度很高,切完後有確實在lader 100b.p.附近看見 02/12 20:21
推 Adler:我最後是用PCR check 出一段約1500b.p.大小的片段 02/12 20:34
→ Adler:謝謝你的回答~^^ 02/12 20:40
推 Adler:ㄜ..回錯了...@@不過還是謝謝 02/12 21:02
※ 引述《willie0208 (我不要現在就出征....)》之銘言：
: 我有一段約4kb的vector要跟一段約2.4kb的insert接起來
: 兩個plasmid兩端的切位分別用NotI和NcoI照理說應該很好接
: 但是我做了兩三個月了~還沒做出來~
: 問題到底出在那~塗盤後我的control組沒長(有加ligase怕自接)
: test組長個兩三顆~挑出來抽DNA後在去用相同的酵素切
: 卻跟原本vector的DNA一樣大~
: 到底是什麼原因???有大大可以救我嗎??
1. 你如何判斷insert確實有切？
2. insert如何來的？
3. 有幾個control，兩個嗎？（有切，沒加ligase;有切，有加ligase）
4. 最後用相同的酵素切，如果你是要接入 MCS site
當然跟原本的vector差不多一樣大阿
你要看有沒兩條band吧（4kb & 2.4kb）！！！
5. 換不同切位，差異性大的（假設primer設計沒問題的話）
6. 先做TA，再sub- clon到你要的vector
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