Re: [問題] 關於cloning

[aswen ( )]

※ 引述《philesazumi (苦悶阿)》之銘言：
: ※ 引述《Adler (Adler)》之銘言：
: : 我想要將一段只有50初b.p.的tag
: : 接到一個約5kb的vector上
: : 想要請問一下 有沒有人做過類似的實驗
: : 可以告訴我insert與vector間的molar ratio大概是多少
: : 我已經試過許多比例了...@@
: : 謝謝大家
:   大小太過懸殊，沒有比較容易接，
:   而且也不容易跑膠看有沒接上
:   可以先跟小一點（幾百bp）的先接完
:   再接到vector上
:  (20~50ng vector x kb size of insert / kb size of vector) x insert:vector
:    molar ratio (3:1或6：1) = ng of insert
:   vector的量不用太多，molar ratio這兩個比例一直做得很好，供你參考

我之前做過也是將一段約50 bp的insert接到約5kb的vector上
試了很多不同比例後
覺得約5:1~10:1都可以
但重點是 把所有長出來的clone都挑來做 PCR (數量不會多到上百個)
一定可以找到有ligation的
(我用的是 Invitrogen Zero blunt TOPO cloning kit)


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◆ From: 61.222.3.155
推 philesazumi:colony...株落
推 turtle24:嗯..每個colony可以算是一個single clone吧??
推 tin0101:是single clone沒錯.我用會沒接近去就會自殺的vector.好用
→ tin0101:只要有長的colony就是有接進去的.命中率大約8-9成
推 philesazumi:我老闆說要用blue-white，只因為會自殺的他沒做過
→ Adler:謝謝你~我會再試試看^^