推 Ackbar:TA 接進去了? 02/14 22:29
推 baca:嗯嗯對阿~~我在PCR產物後加A~~用TA的KIT接近去了~~ 02/14 22:35
推 Ackbar:那你確定你subclone用的vector接點跟你的insert兩端互補嗎 02/14 22:40
推 baca:我用vector切位也是BAMHI跟SMAI兩沏位鄰近 02/14 22:42
推 kirry:蝴蝶牌的Sma I的限制酵素切割的溫度為25度喔 這點有注意到嗎 02/14 23:13
推 baca:有～～水浴25切 02/14 23:33
推 kirry:你接在TA vector上 可個別切一刀 試試看是否是buffer或是限 02/14 23:37
→ kirry:製酵素的問題..還有你的DNA濃度呢 02/14 23:39
推 baca:切一刀都沒問題～～我用2500ng去切insert 02/14 23:42
→ kirry:切完後 純化的濃度呢 02/14 23:46
推 baca:在ＴＡ上ㄉＩＮＳＥＲＴ切下來2刀下來後剩385ng 02/14 23:50
推 cplinn:你所謂接不進去是什麼樣的狀況? control 和 ligation 的 02/15 02:31
→ cplinn:transformant 一樣多? 還是比較多但找不到正確的 clone? 02/15 02:31
→ core308:你的vector夠純嗎 將其純化再用限制酵素作用看看 02/15 09:15
→ core308:另外可以的話兩刀分開切(vector) 02/15 09:16
推 baca:我的transformants滿多的~~淡沒有做VECTOR ONLY的CON~~~ 02/15 09:52
→ baca:我是先沏SMAI再沏BAMHI~~~ 02/15 10:09
推 cplinn:vector only 是絕對必要的 可能你得到的都是 self-ligate 02/15 13:32
→ cplinn:看來還是 vector 處理的問題 下次接時用「少很多」vector 02/15 13:34
→ cplinn:再接接看 還有記得補上 vector only 02/15 13:35