[問題] colony PCR有band 但定序結果錯誤

[pan7353 (要變成自己喜歡的模樣)]

我的 insert DNA 有 846bp(PCR 得到的)

放到 yT&A 的 TA cloning vector 中(用 TA clone 接)

藍白篩選了六個 colony 做 PCR 結果都有還算 specific 的片段

挑了四個 colony 送定序後 結果四個都沒有 insert  DNA 的序列

甚至連 當初做 colony PCR 的 primer 序列都沒有

請問可能發生什麼情況?我是要重做一次嗎?

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.112.79.56
推 alaric:定序的primer用誰的?
→ alaric:另外, 最好是送plamid去定序
推 oooya:如果用vector的primer可能是正反接的問題把序列反轉試試看囉
→ pan7353:定序的primer是vector上的M13,另外 我已經找過反轉互補
→ pan7353:共四種可能性 但都沒有找到
推 elgase:可能是你P到的東西本來就不是你想要的specific product
→ elgase:我們家有遇過這種情況
→ elgase:不如乾脆先直接把PCR product純化後送定序