[問題]有關real-time PCR 的結果?

[raining0924 (..N )]

     最近在作 real-time PCR 的實驗

     在RT-PCR時,有先跑膠,確定確實有產物(且只有一條band)

     但在跑real-time PCR時, 卻發現melting curve 有兩個peak  ..

     我是用lightcycler 機器, 一開始以為是annealing Tm 不夠高..

     但後來調至52度,仍有此現象....

     且跑膠結果發現兩個peak的產物大小為(200bp and 400bp).

     想請教板上各位大大...

     這是什麼原因呢?? 是primer設計不好嗎?..還是??

     最近實驗數據沒一個能交差的..請大家救救我吧...先謝過

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◆ From: 163.25.118.146
推 huangsw:如果有兩個產物 melting curve也不同 可以考慮非特異性
推 raining0924:什麼的非特異性?不懂耶...
推 huangsw:簡單的說  primer夾到non-target sequence
→ aggaci:52度  蠻低的，我都用60度
推 mandible:請換primer~~有primer dimer的情形!
→ mandible:注意一下NTC的Tm值~跟產物是否相當?有的話可能dna conta!