推 aswen:加一些DNAse reverse mix幾秒 然後再去離心就可以了 03/13 19:16
推 LIAR:請問reverse mix是什麼？ 03/14 00:42
推 stemcell:1% NP-40好用 不需要SDS 03/17 00:36
關於mammalian cell total protein extraction的問題
因為lab設備問題,無法用物理方式破細胞
我在網路上找了幾個buffer
目前用的是類似RIPA的配方
含Tris, NaCl,EDTA, 0.2% Triton, 0.1% SDS, 1mM PMSF
10的6次方細胞加入50ul
再把細胞lysis後,12000rpm,離心 30 min之後
有個取上清液的步驟
我可以很清楚的看到細胞被lysis, solution成透明
可是整個solution呈現很黏稠的的情況(DNA造成的嗎?)
幾乎沒辦法取"上清"
除了增加reagent用量外
該怎麼處理這個情況??
請有經驗的大大幫忙一下,感謝!!
另外一個笨問題
SDS是很強的介面活性劑吧
那他到底會不會把protein denature掉??
那如果後續要做蛋白質純化 (protein要有function)
是不是就不應該用SDS??
那又該用什麼reagent來lysis細胞呢???
感謝!!!
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