[問題] 請問有沒有人在做protein上的醣染色

[FromWood (布貓抱抱)]

    現在在做蛋白上的醣染
    就是在跑完SDS PAGE後針對Glycoprotein做染色

    使用的是 PIERCE GelCode系列 Glycoprotein staining kit
    產品如下
    http://www.piercenet.com/Objects/View.cfm?type=ProductFamily&ID=02051020

    簡單來說就是將膠先用methamol固定，
    再將背景buffer置換成醋酸，
    氧化，染色，還原，
    以水洗過之後
    再置於醋酸中(保存)。

    理論上在還原劑下去之後是中止反應，
    具有醣修飾的蛋白會被染成洋紅色。

    我們的確也在最後完成的時候可以看見清楚的band，
    但在用玻璃紙封膠的完畢乾燥之後，
    整塊膠都變成一桶洛神花茶一樣的深桃紅色 (￣□￣|||)a

    在試過幾次之後
    因為曾經有一次不小心讓膠在水裡多放了10幾秒
    發現膠變成淡淡的粉紅色
    所以我們猜想應該跟水有關係....
    到後來就乾脆直接用醋酸封膠，
    然後還是得到深桃紅的膠.....

    詭異的是，曾經有兩個前輩做過這實驗，
    卻是淺淺的粉紅色背景。
    但是他們表示就是照著protocal做沒有更改什麼
    @@....


    不知道有沒有哪位版友做過類似實驗的，可以提供點意見嗎?
    感激不盡。

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 211.75.190.126
推 aggaci:我猜是醋酸沒洗乾淨，因為銀染也是這樣！
推 FromWood:請問樓上 是說reduse後要用大量醋酸洗嗎
→ FromWood:或是說醋酸後要用大量水洗??  謝謝^^
推 aggaci:洗到完全沒醋酸味，多洗幾次嚕
推 datro:Schiff's Stain好像本來就不能久放 要在一定時間內紀錄 久了
→ datro:就會變成 紅吱吱的 老闆拿過他以前的膠來看 都馬是紅的一片