※ 引述《JeffreyS (念)》之銘言：
: ※ 引述《Mouseking (叫我老鼠王....-_-)》之銘言：
: : 請教各位先進
: : 如果我把EGFP放進BL21
: : IPTG induction後
: : 可以純化出一管會發螢光的蛋白質嗎？
: : 一時好奇......有人試過嗎？謝謝？
: (個人沒有試過 不過 覺得這是一個很有趣的問題 可以當成思考練習:p)
: 可以先試想
: eGFP是怎樣的一個蛋白:
: 他與原始自然界水母的GFP有什麼不一樣呢?
: 分子量非常大嗎?
: 具有複雜的修飾 或是需要別的蛋白來幫它摺疊成正確的形狀嗎?
: 還是 需要經過別的酵素加工切成成熟的模樣呢?
: 如果查不到資料呢 那換個角度想好了
: eGFP可以做什麼研究?
: 很常見的用法之一 便是把他接在我們要看的蛋白上
: 可以不用經過繁瑣的免疫螢光染色法 只要直接把表現細胞拿到螢光顯微鏡下一看
: 有綠沒綠 有沒有表現 一看就知道
: 還可以用Sorting的技術 來把表現量高的細胞挑出來 或是用Flow來定量
: 這是做蛋白質功能性研究很方便的一個工具
: (就像是在滿滿的不好笑joke海裡 可以輕鬆的靠m標記 來找出真正的笑點)
: 所以 eGFP不應該是一個很難做又很大的蛋白
: 不然 被我們強迫接上的目標蛋白 不就變成像是拖了鉛球的囚犯 無法發會正常的功能了!!
: 囉哩囉唆嘴砲了這麼多
: 其實 eGFP能不能在細菌上表現 我們應該可以得到一個可靠的假設了
: 接下來 就是實驗驗證啦
我記得GFP這種東西己經有人做過了吧..而且還是常被拿來實驗的工具 f^^"
之前有看一篇paper..就是用這種蛋白來做實驗的
是用一種synthetic gene的觀念,好像是麻省理工作的實驗
把基因設計成類似
[promotor]-[GFP]-[repressor] 這樣
當promotor被啟動時,GFP就會產生,細菌發光,但同時產生repressor去抑制promotor
當promotor被抑制時,GFP不會產生,細菌不發光,但也不產生repressor
這樣一直cycle下去,細菌就會一閃一閃的像聖誕樹啦 ^^
不過由於repressor的堆積,所以目前只有前面有效果
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