推 runpapa0520:你少乘了染色時的稀釋倍數，另外dye用量是1:1吧。 03/25 13:24
推 linker0726:1:1 ? 是指抽出的細胞:trypan blue? 03/25 13:43
推 runpapa0520:是的,如果細胞濃的話可以取PBS稀釋但跟DYE比例還是1:1 03/25 16:26
推 linker0726:恩...因為這也是學長交我的..我其實不知道@@ 03/25 17:07
※ 引述《LIAR (墮天使)》之銘言：
: ※ 引述《boyo (29大頭)》之銘言：
: : 你學長不對 只數中間那塊會有不少誤差
: : 這個protocol寫的才是對的
: : 要數這四大塊的原因 是因為你在load cell suspension到counter時
: : 靠近tip的那邊 一定會比較多細胞 另一邊一定會比較少
: : 所以要數這四塊再平均 當然九塊都數是最準
: : 要緊急數細胞時 比方離心完要立即處理
: : 可以數左上 左下 或是右上 右下
: 我覺得還要考慮原本細胞的多寡，數量少的容易有隨機誤差，要多數一些。
: 所以WBC和RBC在計算時就會算不一樣的格子。
: 另外就是loading的量，我一般會loading到30ul，主要是讓medium衝過頭，避免boyo
: 說的情況，通常我會建議要把整個面蓋滿，最好再流一些到溝槽中。
: 當然溝槽一定要乾淨啦，而且兩邊最好不要同時算不一樣的。
恩..我說說我的方法 請問大家這樣對不對
我要將細胞種到24well內 1well先加1cc medium
將細胞打下來
離心
離完後倒掉上清液 加入6cc medium
沖散細胞 抽出100ul + trypan blue 400ul 數細胞
數最左上 左下 右下 右上的細胞平均數
計算: 數的細胞*6*10^4/ml=總共細胞數
我要種4*10^4/well
所以每well要放入: 總共細胞數/6000=4*10^4/X X=要從6cc內取的量(ul)
請問這樣對嗎??
謝謝
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