推 gilchang:那你要跑開一點。light chain 約25kDa。 03/30 16:16
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: 要用不一樣比較好
: 因為加二抗時認的是一抗的 Fc
: 如果連 IP 也有一樣的 Fc
: 那會有辨認錯誤的狀況發生
: 結果會變成有磷酸化和無磷酸化訊號差別不大
: (Fc:Antibody 的尾端)
: 另一種狀況是有跑 SDS-PAGE
: 此時的 IP 用的 Antibody 的 heavy chain (就是有 Fc 的那一端)
: 會大約在 50kD 左右的位子
: 所以你的目標蛋白質不在這個範圍就可以用同樣的
: 為什麼呢
: 因為當你用二抗時 50kD 這個位子也會被辨認到(IP 和 WB 1抗 同為 Rabbit 時)
: 如果你的目標蛋白質剛好在這附近
: 就會被他"強大"的訊號遮蔽
: 我表達的不是很好
: 希望你看的懂
: P.S. 我們實驗室也用過一樣的 結果我們的目標蛋白質也在 50kD 附近
: 就發現了這個問題
喔喔喔我懂了
嗯我的分子是大約34kD左右
應該是ok的
我試試好了
真的是太謝謝您了
那再請問一下
1. 我做IP所用的beats是protein A
他不是會跟IP antibody結合嗎(2抗的功用)?
那為什麼還會有IP antibody的Fc跑出來呢?
2. Control組作WB所用的抗體也是要用IP那一支嗎?
還是可以用別支已經知道可以抓到目標蛋白的抗體呢?
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