[問題] PCR夾GC rich region

[dropdred (keep the faith)]

最近在夾GC rich的位置,約80%

amplicon約650bp

primer是用primer3設計的,Tm=60度

試過AmpliTaq, 在60度跟touchdown會夾出約300bp的片段

但在升溫上去68度就什麼都沒有了...連殘存的primer都看不見


另外,還試了AmpliTaq Gold

更慘,不論是60, 65, 68度

什麼都沒有...整塊膠只有marker



想請問大家的經驗....感激不盡!!

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 61.228.195.21
推 aggaci:加betaine 1M，我加了就P出來了！！親身經歷
推 silverberry:加 1% DMSO 也 p出來過~~P 2.5 K 的!!
推 dropdred:請問上述所說的是最終濃度嗎
→ aggaci:是..
推 oxoox:可以考慮把denaturing T的時間加長這樣也會有幫助
推 vichael:不考慮作Nested PCR嗎 ^^
推 silverberry:是~~