[問題] PCR跑出來都是smear

[thewholeshit (e04)]

最近在用inverse PCR夾ㄧ段未知序列
可是出來的東西都是smear
我調整過tm值  template濃度  cycle數
用不同廠牌的taq
加formamide (有可能是GC-rich 但實際是不是並不清楚)
但是結果都一樣
請問這樣應該怎麼辦?

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.120.130.113
推 untilnow:水？
推 satantaco:請把詳細依點protocol列出  以及配置法
→ satantaco:你電泳膠是用水去做的還是TAE
推 forWinds:Template最好有稀釋10 100 1000 10000倍的都做過喔...
推 elin116:再使用一次 NEST-PCR 也就是先PCR一次 再用第二組PRIMER
→ elin116:批第二次試試看