※ 引述《studyno1 (汲取知識)》之銘言：
: 我養的是MEF cell 今天早上subculture
: 剛剛看了一下 發現我沒有把細胞均勻分布在dish中
: 所以有些區域細胞較多 有些就很少
: 我的方法是先將適當體積的medium 加在dish
: resuspend trypsin作用後的cell後 再依適當的spilt ratio
: 取出細胞液加在剛剛有medium 的dish 然後前後左右搖晃dish 讓細胞均勻分布
: 可是顯然這樣的方法無法讓細胞很均勻分布 猜測可能我過度搖晃 反而讓細胞不均勻
: 我的問題是
: (1)早上subculture 現在看來細胞已經貼了
: 我可以今天晚上再把細胞打起來讓他分布均勻嗎? 對細胞會不會造成影響?
: (2)可以請大家提供一下subculture後讓細胞均勻分布於dish的方法嗎?
: 謝謝回應^^
MEF是mouse embryonic fibroblast吧
你的作法是不是漏了一步??
MEF大部分的用途是用作ES cell的feeder
所以MEF貼dish貼平均非常重要 貼不平均你的ES cell就很容易分化
你加medium的用途是要inactivate trypsin的作用
加完後要用pipet把dish上的細胞沖乾淨
再吸到15cc tube "pipet幾次 打散細胞" <--你是不是少這步驟
打散完後再去離心 算準要passage多少細胞後
吸去廢液 再加medium去pipet打散pallet
trypsin-EDTA的作用是只是化學性的 你也要加一些物理性的作用
就是用手打散細胞
十字搖勻的 看你的步驟應該沒問題 不過記得搖的時候
前後搖完 要等液面不再晃動再左右搖 不然細胞都在原地散步
有問題再問吧
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如果孔子是那待沽的玉
我便是待斟的酒
用一生的時間 蘊釀自己的濃度
只為等待剎那的傾注
張曉風 釀酒的理由
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